Recapitulando un poco un medio de cultivo es una sustancia o solución que permite el desarrollo de microorganismos, mientras que el cultivo es el producto del crecimiento de un organismo. Los medios utilizados en esta ocasión deben contener los nutrientes suficientes para asegurar el desarrollo y reproducción de los hongos como lo es carbono, nitrógeno, vitaminas, oligoelementos, etc. y un pH ligeramente ácido (6 – 6.3) para facilitar su crecimiento e inhibir al mismo tiempo el desarrollo de otros microorganismos.
Se puede añadir antibióticos antibacterianos para inhibir el crecimiento de bacterias saprofitas que suelen contaminar las muestras.
Los medios pueden ser sólidos o líquidos. Para conseguir un medio sólido se debe agregar una sustancia solidificante como el agar (gelatina vegetal) o el agar (polisacáridos provenientes de algas), el cual no tiene valor nutritivo sino que sirve simplemente para mantener la humedad por un tiempo más o menos prolongado. La humedad es fundamental para el desarrollo de los hongos, porque cuando ésta comienza a disminuir, la formación de micelio también disminuye y el hongo tiene que asegurar su perpetuidad formando estructuras propagativas (esporas, conidias) y de conservación (clamidosporas). El agar empieza a derretirse a partir de 80 oC y soporta temperaturas altas sin descomponerse, solidificándose entre los 35 y 50 oC.
El pH recomendado para el cultivo de hongos en el laboratorio es de alrededor de 7, un pH neutro o ligeramente ácido (6.8).
Ahora hablaremos de aquellos medios de cultivo que se usan de manera más común para aislar el MO de interés. Uno de ellos es el agar agua, este es un medio pobre en el cual el micelio crece en forma muy rala. Es especialmente usado para hacer aislamientos de punta de hifa. De acuerdo a la consistencia que se quiera dar al medio, se puede hacer con mayor o menor cantidad de agar.
Para ellos se utilizan:
Agar 10 g
Agua destilada 1 litro
20
Otro medio usado es Papa dextrosa agar (PDA) el cual es un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de hongos. Beauveria crece muy bien y esporula en este medio.
Cuando se aíslan hongos a partir de insectos colectados del suelo, es recomendable acidificar el medio con ácido láctico al 25%. Se agregan 3 ó 4 gotas sobre el agar solidificado de la placa con el objeto de evitar el desarrollo de bacterias.
Con los mismos ingredientes, excluyendo el agar, se obtiene el medio líquido de Papa Dextrosa (PD), muy utilizado para la preparación del inóculo en forma masiva.
Para ellos se utilizan:
Dextrosa 10 g
Agar 18 g
Agua destilada 1 litro
El Fitolevadura es un medio que se usa para aislar hongos a partir de animales. Los hongos aislados de insectos crecen exuberantemente con micelio bien algodonoso y buena producción de esporas.
Se utilizan:
Dextrosa 20 g
Extracto de levadura 5 g
Peptona 5 g
Agar 18 g
Agua destilada 1 litro
Tenemos un medio de cultivo muy utilizado para aislar hongos de animales el medio Sabouraud. Sirve para el aislamiento y mantenimiento de hongos en tubo inclinado. Debido a su composición, los hongos crecen exuberantemente y esporulan bien.
Es el medio estándar para observar la morfología típica de los hongos, pero no es el medio ideal de crecimiento o para estudiar la esporulación.
Se utilizan:
Dextrosa 20 g
Peptona 10 g
Agar 18 g
Agua destilada 1000 ml
También esta miel peptona agar, este medio se recomienda porque tiene un pH que inhibe el desarrollo de algunas bacterias y para ellos se utilizan
Miel de caña 60 g
Peptona 10 g
Agar 18 g
Agua destilada 1000 ml
Como ya mencionábamos se pueden utilizar antibióticos como Penicilina + Estreptomicina (30 – 50 ppm) que deben agregarse a los medios de cultivo después de ser esterilizados en autoclave y enfriarlos a una temperatura menor a 60 oC.
Existen, además, los llamados medios completos, los cuales varían de acuerdo a los requerimientos del trabajo.
Los medios líquidos son aquellos a los que no se incorpora la sustancia solidificante, pudiendo tener la misma composición que los medios sólidos.
Son utilizados para obtener una producción masiva con fines de inoculación en sustratos de propagación. Los medios líquidos generalmente se colocan en un agitador continuo durante tres o más días de acuerdo a la especie que se está propagando. Cuando se trata de Beauveria en medio líquido las estructuras propagativas toman la forma de las levaduras.
Para evitar la contaminación con bacterias, es recomendable acidificar el medio contenido en la placa con unas gotas de ácido láctico distribuidas uniformemente en la superficie del medio de cultivo.
abigail...Muy buen aporte..Me pregunto si cuentas con informacion extra hacerca de reproducción en medio liquido, sustancias y cantidades añadidas al medio, asi como el tiempo en agitacion,temperatura etc... gracias.
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